抗體篩選“天選”模式，日篩抗體三千個(gè)

更新時(shí)間：2025-03-21 點(diǎn)擊次數(shù)：1050

抗體篩選是抗體藥物開(kāi)發(fā)中的關(guān)鍵一環(huán)。目前代表性的抗體篩選技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、單B細(xì)胞篩選技術(shù)等。

利用合成抗體庫(kù)以及從人或動(dòng)物中分離單個(gè)B細(xì)胞克隆的抗體發(fā)現(xiàn)流程，在生成了候選抗體庫(kù)之后，候選抗體的單獨(dú)表達(dá)和評(píng)估卻往往依賴(lài)于勞動(dòng)密集型程序（例如基于質(zhì)粒的克隆、轉(zhuǎn)染、基于細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)純化）。篩選過(guò)程需要數(shù)周至數(shù)月的時(shí)間，嚴(yán)重制約抗體篩選的速度和通量。

代表性抗體篩選技術(shù)

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)（CFPS）為候選抗體單獨(dú)表達(dá)提供了一種新方式。該技術(shù)是一種無(wú)細(xì)胞膜限制、高開(kāi)放性、高可控性的體外蛋白質(zhì)生物合成技術(shù)。

無(wú)細(xì)胞表達(dá)抗體示意圖

在抗體篩選方面，CFPS相比于細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)具有顯著優(yōu)勢(shì)：

①無(wú)需耗時(shí)的基因克隆、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)流程，從線性DNA片段到候選抗體分子僅需數(shù)小時(shí)；

②可高通量、自動(dòng)化合成抗體，可適配高通量移液工作站進(jìn)行高通量、自動(dòng)化抗體表達(dá)，更節(jié)省人力成本。

基于細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與基于CFPS的抗體篩選對(duì)比

近日，珀羅汀生物攜手玄刃科技成功建立高通量無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)工作站，日篩抗體三千個(gè)，自動(dòng)合成無(wú)人工！抗體篩選告別以周甚至月為周期，進(jìn)入“天選"模式！

珀羅汀無(wú)細(xì)胞抗體篩選，允許以線性化DNA片段作為模板，數(shù)小時(shí)內(nèi)表達(dá)候選抗體，產(chǎn)物可直接進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，無(wú)需純化。另外，珀羅汀生物無(wú)細(xì)胞技術(shù)允許二硫鍵生成，既可表達(dá)VHH、scFv抗體分子片段，也可表達(dá)Fab、全長(zhǎng)抗體，無(wú)抗體種類(lèi)限制。

案例：利用CFPS從單B細(xì)胞中快速篩選單克隆抗體

該研究通過(guò)單B細(xì)胞建立抗體庫(kù)，通過(guò)CFPS表達(dá)并評(píng)估m(xù)Abs，在2天內(nèi)完成了抗原特異性mAbs的篩選。該方案包括從免疫兔的外周血中收集B細(xì)胞、通過(guò)抗原包被的磁珠和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)染色選擇B細(xì)胞、基于單細(xì)胞的PCR、在CFPS中生產(chǎn)mAb以及CFPS產(chǎn)物直接進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

單B細(xì)胞+CFPS抗體篩選方案

參考文獻(xiàn)：

[1] Lu RM, Hwang YC, Liu IJ, Lee CC, Tsai HZ, Li HJ, Wu HC. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases. J Biomed Sci. 2020 Jan 2;27(1):1.

[2] Hunt AC, V?geli B, Hassan AO, Guerrero L, Kightlinger W, Yoesep DJ, Krüger A, DeWinter M, Diamond MS, Karim AS, Jewett MC. A rapid cell-free expression and screening platform for antibody discovery. Nat Commun. 2023 Jul 3;14(1):3897.

[3] Ojima-Kato T, Nagai S, Nakano H. Ecobody technology: rapid monoclonal antibody screening method from single B cells using cell-free protein synthesis for antigen-binding fragment formation. Sci Rep. 2017 Oct 25;7(1):13979.