無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)：突破傳統(tǒng)瓶頸，解鎖3大高難度蛋白應(yīng)用場(chǎng)景

更新時(shí)間：2025-07-25 點(diǎn)擊次數(shù)：668

膜蛋白結(jié)構(gòu)解析卡在表達(dá)階段？

非天然氨基酸標(biāo)記總失??？

蛋白表達(dá)通量太低？

毒蛋白無(wú)法表達(dá)？

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)正在顛蛋白生產(chǎn)困境，為科研與產(chǎn)業(yè)帶來(lái)全新可能。

一、技術(shù)革新：無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)

無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成（CFPS）系統(tǒng)是一項(xiàng)創(chuàng)新技術(shù)，具有廣泛的潛在應(yīng)用。在基礎(chǔ)科學(xué)和應(yīng)用科學(xué)中，CFPS系統(tǒng)是分子生物學(xué)家的重要媒介。與活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)表達(dá)相比，它具有許多優(yōu)勢(shì)，并且更頻繁地用于高通量功能基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)。在創(chuàng)建核酸可編程蛋白陣列（NAPPA）等蛋白質(zhì)陣列或使用顯示技術(shù)創(chuàng)建工程酶時(shí)，CFPS 系統(tǒng)非常重要。連接基因型和表型（表達(dá)蛋白的功能）的主要方法是通過無(wú)細(xì)胞法。此外，CFPS 系統(tǒng)對(duì)于有毒、膜結(jié)合、病毒性且易受細(xì)胞內(nèi)蛋白酶介導(dǎo)的快速蛋白水解破壞的蛋白質(zhì)的表達(dá)至關(guān)重要。下面將從幾個(gè)方面對(duì)比CFPS和傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)形式。

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)：突破傳統(tǒng)瓶頸，解鎖3大高難度蛋白應(yīng)用場(chǎng)景

圖1:反應(yīng)所需的無(wú)細(xì)胞蛋白合成（CFPS）系統(tǒng)組分的圖示

1.表達(dá)階段對(duì)比

2.下游處理對(duì)比

二、核心應(yīng)用場(chǎng)景與案例

場(chǎng)景1：全長(zhǎng)跨膜蛋白生產(chǎn)——藥物靶點(diǎn)開發(fā)的"鑰匙"

跨膜蛋白（TMP）位于不同的膜中，它們?cè)诩?xì)胞或細(xì)胞器的內(nèi)側(cè)和外側(cè)之間提供門。人類蛋白質(zhì)組中大約 25% 的編碼蛋白包含一個(gè)或多個(gè)膜區(qū)域。全長(zhǎng)跨膜蛋白作為細(xì)胞信號(hào)傳遞和物質(zhì)交換的核心載體，是目前最主要的藥物靶點(diǎn)，占現(xiàn)階段已知藥物靶點(diǎn)的60%以上。然而，全長(zhǎng)膜蛋白難溶于水、易聚集失活，是蛋白表達(dá)中的難點(diǎn)?；诩?xì)胞表達(dá)往往效果不好；采用如VLP等方法時(shí)雖然能得到全長(zhǎng)膜蛋白，但是不相干雜蛋白干擾過大；采用膜蛋白胞外區(qū)截?cái)嗟姆椒ㄔ诘鞍仔阅苌系娘L(fēng)險(xiǎn)有較大隱憂。而無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)，則可以高成功率、高純度、高活性的表達(dá)全長(zhǎng)膜蛋白。

珀羅汀生物案例：全長(zhǎng)CLDN 18.1膜蛋白可溶表達(dá)

實(shí)驗(yàn)人員構(gòu)建了融合標(biāo)簽的CLDN 18.1質(zhì)粒，選用合適的珀羅汀無(wú)細(xì)胞表達(dá)條件體系，進(jìn)行表達(dá)。通過在無(wú)細(xì)胞反應(yīng)體系中加入表面活性劑，實(shí)現(xiàn)CLDN 18.1的可溶表達(dá)。經(jīng)純化，成功獲得80%以上純度的CLDN 18.1蛋白。下游活性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，CLDN 18.1蛋白具有良好的生物學(xué)活性！

（詳情鏈接：明星膜蛋白CLDN 18.1新合成路線：無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)全長(zhǎng)蛋白表達(dá)

此外我司基于自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)，已成功表達(dá)多種單次、四次、七次全長(zhǎng)跨膜蛋白，表達(dá)成功率接近100%！

場(chǎng)景2：難度蛋白表達(dá)生產(chǎn)—突破蛋白結(jié)構(gòu)研究的“限制"

某些蛋白質(zhì)因其特殊的結(jié)構(gòu)特征和理化性質(zhì)，被歸為難表達(dá)蛋白，它們不僅是基礎(chǔ)科學(xué)的重要課題，更是藥物開發(fā)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)和生物制造的瓶頸問題。在傳統(tǒng)表達(dá)體系中難表達(dá)蛋白往往面臨產(chǎn)量低、活性差等問題，它們的表達(dá)障礙主要源于三個(gè)層面的限制：

1.分子層面，如含有密集二硫鍵網(wǎng)絡(luò)或復(fù)雜四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白（如抗體Fab片段、多亞基酶復(fù)合體），極易在折疊過程中發(fā)生構(gòu)象錯(cuò)誤，形成無(wú)活性的包涵體；

2.細(xì)胞層面，疏水性強(qiáng)的跨膜蛋白或依賴特定糖基化修飾的功能蛋白（如GPCRs、凝血因子Ⅶ），難以在普通宿主細(xì)胞中維持其天然構(gòu)象；

3.生理層面，具有細(xì)胞毒性的蛋白（如溶菌酶）會(huì)直接干擾宿主細(xì)胞的正常代謝，造成表達(dá)系統(tǒng)崩潰。此外，培養(yǎng)環(huán)境的細(xì)微變化（如氧化還原電位波動(dòng)、分子伴侶缺失）都可能引發(fā)蛋白的錯(cuò)誤加工或降解，進(jìn)一步降低表達(dá)成功率。

珀羅汀生物案例：毒蛋白生產(chǎn)

依托PLD無(wú)細(xì)胞快速表達(dá)技術(shù)，成功表達(dá)出BamHI限制性內(nèi)切酶。通過在質(zhì)粒中加入PLD無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)的BamHI限制性內(nèi)切酶，濃度分別為0、0.001、0.0015、0.015、0.15 ug/uL，37℃酶切1h，驗(yàn)證酶活性。實(shí)驗(yàn)證明PLD無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)的BamHI限制性內(nèi)切酶具有活性，低濃度為 0.001 ug/uL即可顯示酶切活性。

詳情鏈接：無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)——難度蛋白表達(dá)“急救包"

此外，我司無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)平臺(tái)已成功用于合成各種分子量的蛋白質(zhì)，從單結(jié)構(gòu)域到多結(jié)構(gòu)域、單個(gè)亞基到多亞基蛋白復(fù)合體，分子量從10 kDa到160 kDa，PLD無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)都能勝任，并得到活性驗(yàn)證。

場(chǎng)景3：高通量篩選——抗體優(yōu)化的"全自動(dòng)工廠"

在抗體藥物研發(fā)中，高通量篩選（HTS）已成為縮短開發(fā)周期、提升抗體性能的核心技術(shù)。然而，傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的局限性，使得這一過程仍面臨效率與成本的博弈。比如現(xiàn)代抗體工程（如噬菌體展示、單B細(xì)胞測(cè)序）可生成數(shù)百萬(wàn)種候選序列，但傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)僅能逐批測(cè)試，耗時(shí)數(shù)月。抗體需同時(shí)滿足親和力、穩(wěn)定性、可溶性、低免疫原性等要求，傳統(tǒng)方法需分步測(cè)試。

珀羅汀生物案例：打造高通量無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)工作站

我司打造的高通量無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)工作站，實(shí)現(xiàn)抗體篩選技術(shù)的革命性突破！該平臺(tái)具備三大優(yōu)勢(shì)：

超高通量篩選能力：每日可完成3000個(gè)抗體的自動(dòng)化篩選，將傳統(tǒng)以周/月為單位的篩選周期壓縮至24小時(shí)內(nèi)，真正實(shí)現(xiàn)"今日設(shè)計(jì)-明日驗(yàn)證"的研發(fā)新范式。

全流程無(wú)人化操作：從DNA模板到功能抗體的全自動(dòng)合成系統(tǒng)，支持線性化DNA片段直接表達(dá)，數(shù)小時(shí)內(nèi)表達(dá)候選抗體，全程無(wú)需人工干預(yù)和純化步驟。

全抗體類型兼容：突破性解決二硫鍵正確配對(duì)難題，可高效表達(dá)從VHH、scFv等小分子片段到Fab、全長(zhǎng)抗體的所有類型。

詳情鏈接：抗體篩選“天選"模式，日篩抗體三千個(gè)

結(jié)語(yǔ)

在生命科學(xué)研究和藥物開發(fā)中，蛋白表達(dá)技術(shù)始終是突破創(chuàng)新的核心驅(qū)動(dòng)力。無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)以其快速、靈活、高效的優(yōu)勢(shì)，正在重塑傳統(tǒng)蛋白研究的邊界——無(wú)論是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的全長(zhǎng)膜蛋白、傳統(tǒng)系統(tǒng)難以駕馭的高難度蛋白，還是需要精準(zhǔn)修飾的非天然氨基酸插入蛋白，都能通過這一技術(shù)獲得突破性進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)

1.Maharjan A, Park JH. Cell-free protein synthesis system: A new frontier for sustainable biotechnology-based products. Biotechnol Appl Biochem. 2023;70(6):2136-2149. doi:10.1002/bab.2514.

2.Dobson L, Tusnády GE. MemDis: Predicting Disordered Regions in Transmembrane Proteins. Int J Mol Sci. 2021;22(22):12270. Published 2021 Nov 12. doi:10.3390/ijms222212270.

3.Chen JP, Gong JS, Su C, Li H, Xu ZH, Shi JS. Improving the soluble expression of difficult-to-express proteins in prokaryotic expression system via protein engineering and synthetic biology strategies [published online ahead of print, 2023 May 25]. Metab Eng. 2023;78:99-114. doi:10.1016/j.ymben.2023.05.007.

4.Manzer ZA, Selivanovitch E, Ostwalt AR, Daniel S. Membrane protein synthesis: no cells required. Trends Biochem Sci. 2023 Jul;48(7):642-654.

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)：突破傳統(tǒng)瓶頸，解鎖3大高難度蛋白應(yīng)用場(chǎng)景

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)：突破傳統(tǒng)瓶頸，解鎖3大高難度蛋白應(yīng)用場(chǎng)景