在藥物開發(fā)領(lǐng)域,靶點(diǎn)膜蛋白制備一直是科研工作者面臨的重大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)難以實(shí)現(xiàn)功能性膜蛋白的高效制備,嚴(yán)重制約了藥物開發(fā)進(jìn)程。
近日,珀羅汀生物采用無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng),成功制備出高活性人源SSTR2膜蛋白,經(jīng)表面等離子共振技術(shù)完成精準(zhǔn)親和力檢測,實(shí)測其對相應(yīng)抗體展現(xiàn)出超高親和力,KD值達(dá)0.649 nM!
SPR技術(shù):分子互作檢測的"金標(biāo)準(zhǔn)"
表面等離子共振技術(shù)(SPR)作為無標(biāo)記、實(shí)時(shí)監(jiān)測生物分子相互作用的權(quán)-威方法,能夠精準(zhǔn)解析結(jié)合參數(shù)(ka、kd及KD值),提供分子互作的全面信息,被業(yè)界認(rèn)為親和力檢測的可靠技術(shù)平臺。
本次實(shí)驗(yàn)以Tidutamab類似物(Human IgG1)作配體,將其捕獲在Protein A芯片,濃度為1 μg/mL。將分析物SSTR2膜蛋白稀釋為5個濃度梯度(12.5 nM ~200 nM),分別進(jìn)行檢測。SSTR2膜蛋白由珀羅汀生物無細(xì)胞蛋白表達(dá)平臺制備,產(chǎn)品名稱:Human SSTR2 Full-Length Protein,產(chǎn)品編號:PLDP0047-1;運(yùn)行試劑:1*PBS,0.05% DDM,0.01% CHS,pH 7.4。

珀羅汀膜蛋白產(chǎn)品目錄

SSTR2膜蛋白SDS-PAGE

經(jīng)親和力檢測以及動力學(xué)曲線擬合,SSTR2膜蛋白與Tidutamab類似物的親和力常數(shù)為0.649 nM。
無細(xì)胞表達(dá)技術(shù):膜蛋白研究的利器
無細(xì)胞蛋白表達(dá)(CFPS)是一種體外直接合成蛋白質(zhì)的生物反應(yīng)。珀羅汀無細(xì)胞膜蛋白表達(dá)技術(shù)可控性、開放性高,可以在體系中直接添加去垢劑或納米盤,為膜蛋白提供類膜環(huán)境,從而實(shí)現(xiàn)全長膜蛋白可溶性表達(dá)。珀羅汀無細(xì)胞系統(tǒng)在合成膜蛋白時(shí),無需細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)復(fù)雜的靶向、插入、組裝過程,極大提高表達(dá)成功率。
無細(xì)胞+去垢劑表達(dá)體系特點(diǎn):
規(guī)避毒性問題:無需維持細(xì)胞活力,可大量表達(dá)膜蛋白;
折疊環(huán)境可控:通過優(yōu)化去垢劑類型和濃度,為膜蛋白提供最適折疊環(huán)境。
無細(xì)胞+納米盤表達(dá)優(yōu)勢顯著:
模擬天然環(huán)境:在天然脂質(zhì)雙分子層中完成膜蛋白折疊;
功能更完整:更接近生理狀態(tài)下的構(gòu)象和活性。
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